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      抗體生產流程

      發布時間:2019-07-12 14:51:13 | 來源:

      一、流程圖:疫苗免疫→采血→親和層析柱提取→脫鹽→檢測→分裝→成品

      二、操作程序:

      (一)血清生產及過程檢測:

      1、疫苗

      2、注射兔子第一次

      3、注射兔子第二次(第14天)

      4、注射兔子第三次(第28天)注射

      5、第35天每兔采1滴血做ELISA

      6、第42天滴度<1:3200每兔采1滴血做ELISA,注射第四次。滴度≥1:3200的 第42天采多量血,注射第四次。

      7、第49天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

      8、第56天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第五次滴度≥1:3200的 第56天采多量血。

      9、第63天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

      10、第70天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第六次滴度≥1:3200 的第70天采多量血,注射第五次。

      11、第77天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。

      12、第84天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第七次滴度≥1:3200 第84天采多量血,以后每15天采血一次。

      13、第91天滴度<1:3200的每兔采1滴血做ELISA。做ELISA后,結果仍<1:3200,則決定處置兔子。

      14、滴度≥1:3200的 第98天采血,注射第六次,以后每15天采血一次。每30天注射一次。

      (二)抗體提純及檢測

      1、過柱:收集血清至約100ml時過柱,根據血清的ELISA滴度、第一次和第二次過柱所得沉淀量的差異,決定過柱血清量??贵w收集:1)滴度高的、重要的抗體用丙酮來沉淀所收集的抗體液,其他抗體用硫酸銨沉淀。2)抗體量多的,加入磷酸三鈉中和后,用蒸餾水透析1小時,再用0.1M的磷酸三鈉透析2小時(透析方法見透析膜操作步驟LGBZ-008),然后想臘腸那樣風干,待體積極小了,倒入試管中,上凍干機凍干(動感方法見凍干機說明書。)。

      2、抗體量小的,先用硫酸銨沉淀,收集夠足夠量后,用一蒸水逐漸溶解至透明,用G25脫鹽柱脫鹽。(具體步驟見脫鹽柱脫鹽步驟LGBZ-007)

      3、凍干后的抗體,用小勺刮下抗體粉末、稱重、放入適宜的試管內蓋緊,測好百分含量后標記好后,-20度保存;同時稱少量抗體樣品做檢測用,稱好的抗體樣品放入1.5ml離心管,按抗體重量加入適量50%甘油+PBS,讓抗體濃度大約在1-5mg/ml之間。

      4、檢測抗體樣品:

      1)蛋白濃度(具體步驟見BCA法蛋白定量操作步驟)

      2)抗體滴度(具體步驟見ELISA檢測步驟LGBZ-010)

      3)WB(具體步驟見免疫印跡實驗步驟)

      5、標記

      檢測蛋白濃度后,以檢測蛋白濃度日期為抗體批號,在標簽紙上寫上抗體名稱、蛋白濃度、滴度、WB稀釋度,貼在管壁,再用封口膠將標簽文字覆蓋防水。放-20度保存。

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