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      免疫印跡技術服務(western blot)

      發布時間:2019-07-12 16:00:55 | 來源:

      免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blot),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。Western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡(Western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡(Western blot)常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。

      藍光生物為您提供全套免疫印跡(Western blot)技術服務和相關的試劑耗材。主要實驗步驟如下:

      1. 蛋白質抽提

      (1). 組織樣品:取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑),勻漿后抽提總蛋白(或核蛋白)。

      (2). 細胞樣品:每份樣品取1×1061×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑)抽提總蛋白(或核蛋白)。

      2. 蛋白質定量:按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。

      3. 性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣,標準加進第一個孔中,電泳分離蛋白。
      4.
      蛋白質轉移到PVDF/NC膜:按六一蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,設定恒流轉膜。

      5. Western blot膜的封閉和抗體孵育

      (1) 膜在5%脫脂奶粉溶液或3% BSA溶液中室溫孵育2小時以封閉膜上的非特異結合。

      (2) 封閉過的膜漂洗后,加入一抗室溫孵育2小時,使抗體與目的蛋白結合。

      (3) 漂洗后,加入配對HRP標記的二抗結合一抗,室溫孵育膜1小時。

      6. Western blot結果檢測:化學發光法檢測,膜與化學發光底物孵育,經X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件,并用BANDSCAN分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數字化。

      7. 提供實驗報告:包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關數據。

      8. 服務費用:服務內容包含蛋白抽提、蛋白濃度測試以及免疫印跡測試【每張膜上做一種目的蛋白。每張膜上可以做8個樣品(不足8個按8個計算),測試目的蛋白和內參抗體?!?,包含其他試劑耗材但不包括抗體費用,每張膜的費用是:1000.00元。時間:1-2周。

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